免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,用于確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用。其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x,那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合,也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
CoIP與質(zhì)譜聯(lián)用的原理是:如果一種目標(biāo)蛋白是某一蛋白復(fù)合物的一部分,利用目標(biāo)蛋白的特異性抗體,就可以對整個蛋白復(fù)合物進(jìn)行富集,進(jìn)而利用質(zhì)譜鑒定這個蛋白復(fù)合物中的其他成員。
技術(shù)路線

技術(shù)優(yōu)點
相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài)。
蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響。
可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。





