Absolute Mag? TEV protease磁珠是一種表面固定有TEV protease (TEVp)的磁性顆粒，主要用于融合蛋白上的標簽的去除，使用后的蛋白酶磁珠可以回收重復利用。TEVp是由煙草蝕刻病毒基因組中的Nla（核包含蛋白基因）控制表達，分子量約為28 kDa，可以識別Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七氨基酸序列，并在谷氨酰胺（Gln）和甘氨酸（Gly）之間進行切割，如果標簽和目的蛋白之間是通過該七氨基酸序列進行融合，則可以被TEVp有效切割。TEVp具有高度特異性和良好的催化活性，是目前廣泛用于融合蛋白標簽去除的蛋白酶。

Absolute Mag? TEV protease磁珠，利用TEVp和鏈霉親和素融合形成一種復合蛋白，然后與表面生物素包被的磁珠相混合，通過鏈霉親和素和生物素的親和作用，從而使TEVp固定到磁珠表面，形成TEVp磁珠。該磁珠不僅可以有效去除標簽，而且反應后可以直接使用磁鐵吸附將蛋白酶標記磁珠從混合蛋白溶液中迅速分離，而無需像傳統的重組蛋白酶必須經柱純化才能去除，極大地簡化了蛋白純化的步驟，被消化后的目的蛋白和標簽混合物只需經過標簽吸附柱去除標簽即可得到純化的目的蛋白。

產品特點：

• 直接通過TEVp磁珠純化蛋白，不需要柱層析操作；

• 減少下游蛋白酶污染；

• 可以重復利用一個月；

• 適用于親和標簽的切割，蛋白質中TEV位點的鑒定，以及工程化蛋白質的活化/失活。

使用方法：

（1）向管中加入磁珠，Buffer和目標蛋白，充分混勻；
（2）30℃下，在末端旋轉器上孵育6小時或過夜；
（3）孵育過后，將溶液置于磁鐵上吸附5分鐘后，分離出的上清液即為切割后的融合蛋白和標簽的混合物；
（4）將混合物按照需要進行處理；磁珠可以用Storage Buffer (PBS buffer) 清洗3x5 min后，存放在4℃再次利用。

建議使用：

（1）每250 μl-1 ml反應體系，建議使用50-100 μl磁珠懸浮液。如果磁珠保存在4℃條件下，可以維持活性超過1個月。磁珠可以重復用于多種蛋白酶反應。
（2）向反應體系中添加終濃度為10 mM的DTT或β-ME，可以獲得較佳的底物蛋白水解效果。

實驗數據：

以MBP-ENLYFQS-GFP底物蛋白標簽去除為例。左圖為Absolute Mag? TEV protease磁珠在4℃和30℃下裂解MBP-ENLYFQS-GFP底物蛋白的SDS-PAGE分析。在30℃下，200 μl的74.6 kDa底物蛋白（0.1 mg/mL）與50 μl TEVp磁珠孵育過夜后，被有效裂解90%。而在4℃下過夜孵育，切割效率降低為21%。右圖為Absolute Mag? TEV protease磁珠在4°C下儲存一個月后進行酶活檢測。SDS-PAGE凝膠顯示在30℃下200 ul的74.6 kDa底物蛋白（0.1mg / mL）與50 ul TEVp磁珠孵育過夜后，依然被有效切割（90%）。