穩定細胞系在基因功能研究、重組蛋白制備、藥物篩選及靶點驗證、腫瘤治療等生物學研究中發揮重要作用。安必奇生物專業的研發團隊擁有豐富的細胞系構建和CRISPR/Cas9基因編輯項目經驗，致力于為廣大客戶提供定制的基因編輯細胞系構建服務。我們的服務涵蓋基因敲除細胞系、條件敲除細胞系、基因敲入細胞系、定點突變細胞系、基因激活/抑制細胞系。基于穩定的細胞轉染系統和基因編輯系統，我們成功在不同細胞系實現基因編輯，包括但不限于易轉染細胞或難轉染腫瘤細胞，神經細胞，干細胞和其他細胞。

服務內容：

• 基因敲除細胞系

安必奇生物提供單基因敲除細胞系，多基因敲除細胞系和大片段刪除細胞系定制服務。

• 條件敲除細胞系

基因的表達具有時空特異性，對體內關鍵基因進行敲除和替換等方式的基因編輯，往往導致動物胚胎死亡，阻礙基因的功能研究。條件性敲除可以使目標基因的表達或缺失發生在動物發育的某一特定階段或某一特定組織器官。安必奇生物將Cre-LoxP重組系統與CRISPR/Cas9技術相結合，為廣大客戶提供穩定的條件敲除細胞系。

• 基因敲入細胞系

我們的基因敲入細胞系包括報告基因敲入細胞系和客戶指定基因敲入細胞系，使用優化后的CRISPR/Cas9系統，我們成功為客戶完成大片段基因敲入項目。

• 定點突變細胞系

利用CRISPR/Cas9技術，通過引入特定的修復模板，實現對目標基因堿基序列的定點修飾，包括堿基的添加、刪除和替換。

• 基因激活/抑制細胞系

安必奇的利用dCas9-VP64/dCas9-KRAB基因穩定表達的單克隆細胞株，通過將啟動子靶向的sgRNA導入dCas9-VP64/dCas9-KRAB穩定細胞株，從而實現靶向的內源基因激活/抑制。

定制基因編輯細胞系構建服務流程：

• 項目評估：評估目標基因敲除/敲入是否具有可行性，預實驗檢測靶細胞轉染效率和單克隆生長能力。

• sgRNA設計與載體構建：設計多個sgRNA，構建載體，通過細胞實驗篩選編輯效率較高的sgRNA。

• 細胞轉染：將CRISPR載體或RNP利用電轉法或病毒轉染法導入受體細胞。

• 單克隆篩選與驗證：測序驗證基因水平敲除(默認方法)，FACS和WB驗證蛋白水平敲除(可選)。

• 交付穩定細胞系：支原體檢測無污染后，交付基因編輯細胞系。

交付內容

• 穩定細胞系（單克隆或細胞池）

• 項目報告

我們的優勢

• 使用優化的CRISPR/Cas9系統，編輯效率高，脫靶效率低。

• 多種方案供選擇，定制化服務滿足不同的研究需求。

• 定期匯報實驗進度，實驗過程透明化。