一、技術簡介
主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex, MHC）是一群緊密連鎖并呈現高度多態性的基因群的統稱，其編碼的分子參與抗原遞呈，制約細胞間相互識別及誘導免疫應答。人的MHC即稱HLA（human leucocyte antigen），即人類白細胞抗原，為6號染色體短臂一段約3.6M的參與免疫反應的多態性區域，是迄今已知基因中等位基因多態性較高的基因復合體，有幾十個基因座位，每個基因座位又有幾十個等位基因，且呈共顯性表達。由于MHC基因位于同一條染色體上，其多基因座位上的基因型組合相對穩定，很少發生同源染色體間交換，這就構成了以單元型(HAPLOTYPE，即在同一條染色體上緊密連鎖的一系列等位基因的特殊組合)為特征的遺傳。
HLA抗原多態性檢測在醫學實踐和科研中具有十分重要的意義。與HLA相關的疾病多達100多種，涉及自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、過敏性疾病、感染類疾病、代謝性疾病等，如糖尿病，類風濕性關節炎，銀屑病、強直性脊柱炎、重癥肌無力和哮喘等。同時，HLA在器官和骨髓等移植中起到至關重要的作用，也與許多藥物的嚴重不良反應相關。因此，進行HLA分型，有利于免疫相關疾病的研究、疫苗和藥物靶向人群篩選、種族進化的研究、組織和器官移植等。
目前安必奇提供基于新一代測序（NGS）的方法，使用Illumina Miseq系統進行高分辨率HLA分型，一般可以檢測11個位點，即HLA -A, -B, -C, -DRB1, -DRB3, -DRB4, -DRB5, -DQA1, -DQB1, -DPA1, 和 -DPB1，從而提供等位基因或等位基因組合。該技術可以將高分辨率HLA分型的成本降低到常用的低分辨率或中等分辨率方法的成本，同時保證方法和應用的等效簡單性。
二、方法構建
傳統的HLA分型以血清學和細胞學方法為主，HLA基因分型技術是近年來發展起來的一種分子生物學技術。目前HLA基因分型主要運用PCR技術，結合等位基因特異的寡核苷酸(allele-specific oligonucleotide，AS0ASO)或序列特異的寡核苷酸探針(sequence-specific oligonucleotide probes, SSO)對HLA系統進行DNA分型。通過二代測序數據分析進行HLA分型，可獲得小至單個SNV 基因型的多態性，大至單體型信息。通過捕獲測序技術，可針對MHC區域進行捕獲，使得測序深度和準確性更高。HLA分型的分辨率可以分為以下四類：
a. 2位為等位基因；
b. 4位為特定HLA 蛋白質；
c. 6位為特定HLA 編碼序列(CDS)；
d. 8位特定的HLA 基因序列包括未翻譯區和內含子。
三、技術原理
基于液相DNA探針雜交捕獲技術，通過生物素標記的DNA探針與HLA區域基因DNA序列進行液相雜交捕獲及高效富集，經PCR線性擴增后進行文庫質檢，合格即可在Illumina平臺上進行高通量、高深度測序，通過生物信息學分析完成HLA分型。
四、技術優勢
1. 準確性高：分型精度一般為4位，可高達8位精度分型。
2. 穩定性好：相比于血清法和細胞法具有更好的穩定性。
3. 捕獲率高：捕獲效率60%-70%（不含側翼區）/捕獲效率95%（包含側翼區）。
4. 覆蓋度高：覆蓋度達97.22%，且覆蓋均一性好，推薦測序深度≥100x。
5. 針對性強：針對HLA區域DNA序列進行捕獲測序，無需通過全基因組測序或外顯子測序進行HLA分型，更高效。
五、應用領域
1. 適于移植免疫相關的疾病或特殊疾病的研究。
2. 適于臨床移植的高分辨配型。
3. 適用于HLA科研項目和研究其遺傳變異。
