新陳代謝網(wǎng)絡(luò)是復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),特別是人體的代謝網(wǎng)絡(luò),一直被認為是相對復(fù)雜的代謝網(wǎng)絡(luò)?,F(xiàn)在多數(shù)信號通路的研究是集中在代謝網(wǎng)絡(luò)的一個很小的領(lǐng)域?;蚪M學(xué)、蛋白組學(xué)研究已經(jīng)揭示了部分調(diào)節(jié)通路,但是和代謝網(wǎng)絡(luò)直接相關(guān)的是代謝產(chǎn)物。從多種代謝產(chǎn)物中選取研究對象,無疑是困難的。非靶向代謝組學(xué)又稱為發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué),主要是將對照組和實驗組的代謝組(某一生物體的全部代謝物)進行比對,以找出其代謝物的差異。代謝組學(xué)研究通過一定的手段能夠幫助研究員從代謝產(chǎn)物海中跳出來,提供一個“航拍”的視角,從而發(fā)現(xiàn)差異性代謝產(chǎn)物。然后通過已知的代謝通路逆推找出調(diào)節(jié)酶和基因,完成疾病發(fā)病機制、藥物治療機制等方面的研究。
同時,我們的醫(yī)學(xué)疾病分子機制整體課題外包服務(wù)提供基于代謝通路穩(wěn)態(tài)調(diào)控和能量代謝研究。
分析流程
非靶向代謝組學(xué)的一般分析流程為
代謝譜分析(也稱為差異表達分析):在一組實驗和對照樣品中,尋找豐度改變有統(tǒng)計學(xué)意義的感興趣代謝物;
鑒定:進行代謝譜分析后,測定這些代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu);
解釋:解釋所發(fā)現(xiàn)的代謝物與生物過程或生物狀態(tài)之間的關(guān)聯(lián)。
技術(shù)路線

數(shù)據(jù)平臺

1. NMR(核磁共振)
優(yōu)點是對樣品無破壞性,測定無偏向性,既適用于血液、尿液體液等液體樣品,也適用于組織和器官等固體樣品,并且測定速度快,可實現(xiàn)樣品代謝組的動態(tài)監(jiān)測,缺點主要是分辨率較低。
2. GC-MS(氣相色譜)
GC-MS是代謝組學(xué)研究的技術(shù),具有技術(shù)成熟穩(wěn)定、分辨率高等特點,同時,由于具有相對完善的數(shù)據(jù)庫,使得定性也好一些,缺點則主要表現(xiàn)在樣品處理復(fù)雜,并且對于不易衍生化的物質(zhì)定性和定量較困難,影響了該技術(shù)在更大范圍內(nèi)的使用。
3. LC-MS(液相色譜)
優(yōu)點主要表現(xiàn)在樣品制備和前處理簡單、實驗重復(fù)性好,分辨率高,分離和分析范圍大,缺點則主要表現(xiàn)在數(shù)據(jù)庫完善程度不夠,定性相對困難。
樣品要求
血清:
1、樣品量要求:
NMR: 500μl/例 (不得低于200μl/例);GC-MS or LC-MS: 200μl/例;
避免反復(fù)凍融。
2、收集步驟:血液收集在離心管中靜置30分鐘進行凝固。然后3000rpm離心5分鐘,取上清裝載干凈的離心管中,再離心5分鐘,8000rpm,取上清分裝到凍存管中,每管0.2 or 0.5ml,立即-80度凍存,直到干冰寄送。
3、注意事項:
(1)取血時如用酒精消毒,請擦干擦拭部位,待酒精完全揮發(fā)后再取樣。
(2)取血時如用麻醉劑,建議用異氟醚 ,防止在NMR血清譜圖中出現(xiàn)干擾峰。
(3)如要采用血漿,請使用肝素鈉抗凝管。
尿液:
1、樣品量要求:1ml/例,原則上可以多取一點。
2、收集步驟:尿液直接分裝到離心管中,每管1ml,添加一滴(約10μl)質(zhì)量體積為1/100(w/v)的疊氮化鈉,-80度凍存寄送。
瘤胃液:
1、樣品量要求:1ml/例,原則上可以多取一點。
2、收集步驟:瘤胃液經(jīng) 6000×g 離心15min,取上清,分裝, -80℃冷凍保存,干冰寄送。
為了讓樣品能保存更長的時間,取樣之后可添加一滴(約10μl)質(zhì)量體積為1/100(w/v)的疊氮化鈉溶液。
其他種類的樣品在收集之前請聯(lián)系公司銷售工程師。





