背景介紹
酵母表達系統兼有原核和高等真核系統的優點,是真核表達蛋白的常用系統之一,具有真核表達系統的許多有點:如培養條件簡單、生長速度快、表達水平高、操作簡便、成本低廉,蛋白翻譯后能進行正確加工、修飾,合理的空間折疊,使得蛋白的可溶性得到提高,是較優的重組真核蛋白生產制備的工具。
安必奇生物具有豐富的酵母蛋白表達的經驗,有多種酵母表達系統,包括畢赤酵母系統和釀酒酵母系統,成功表達出超過500多種重組蛋白。我們提供篩選酵母表達高拷貝菌株的服務,可以滿足客戶的多種特殊需求,利用酵母表達系統成功表達過具有二硫鍵蛋白及糖基化蛋白,使蛋白具有類似天然的結構和翻譯后修飾,保證了蛋白的活性。
酵母表達系統對誘導時間及溫度的控制,培養條件和菌株生長周期的把握要求十分嚴格,合適的培養條件是成功實現重組蛋白表達的關鍵,我們的技術人員通過整合流程,把握控制關鍵因素,對不同蛋白進行定制化的實驗設計,成功的提高重組蛋白的表達水平。
服務優勢
高生產率:分泌信號序列保證了重組蛋白的大分泌量
兩種表達體系可供選擇:可選擇組成性表達或者誘導表達兩種體系
大規模生產:高達500L的生物反應器,足以達到克級水平蛋白的生產
多種菌株和載體可供選擇:我們提供包括X33、GS115、SMD1168等多種菌株和多種載體
服務項目及流程
| 實驗流程 | 實驗內容 | 交付結果 | 周期 |
| 密碼子優化+基因合成 | 安必奇的密碼子優化技術,涉及基因合成、載體構建、基因保證轉錄、mRNA翻譯、翻譯后修飾等環節。 | 優化序列 | 6-8周 |
| 載體構建+菌株轉化 | 對構建好的重組質粒電轉化/PEG誘導轉化/原生質體轉化進入表達菌株,安必奇生物提供多種表達載體與菌株的組合,根據不同的蛋白選擇適合的菌株和載體進行實驗 | 載體圖譜 | |
| 高表達菌株鑒定篩選 | 通過PCR方法確定陽性轉化株, SDS-PAGE電泳檢測培養上清中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。 | 檢測結果 | |
| 蛋白表達分析鑒定 | 對挑選的單克隆菌株進行小試表達檢測 | ||
| 蛋白表達條件的優化 | 挑選陽性克隆進行常規表達篩選,并對其中表達較好的菌株優化表達條件。對挑選出來的單克隆菌株,優化培養及誘導條件(培養基,菌體密度,甲醇濃度,誘導時間等),提高目標蛋白的表達量 | 優化結果 | |
| 大規模蛋白表達和純化 | 根據選取的適合的表達條件進行大規模表達純化 | 目的蛋白 | |
| 目的蛋白質檢 | 利用定性或者定量分析的方法進行蛋白質鑒定 | 檢測結果 | |
| 最終交付 | 根據客戶需求,提供蛋白凍干等服務 | 目的蛋白及實驗報告 |






